【摘要】目的:研究抑癌基因p53和增殖細胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)在子宮頸癌中的表達特點，并探討其與病理分級的關(guān)系。方法:應用免疫組織化學ElivisionTM二步法檢測35例宮頸癌及30例正常宮頸組織中p53及PCNA的表達情況，并結(jié)合病理分級進行分析。結(jié)果:①P53蛋白在宮頸癌組織中的表達率為85.71%(30/35)，明顯高于在正常宮頸組織中的表達率6.67%(2/30)，P=0.001;②P53蛋白陽性表達率與宮頸癌組織的病理學分級有關(guān)，P53在宮頸癌Ⅰ級中的陽性表達率57.14%(8/14)明顯低于Ⅱ級86.67%(13/15)和Ⅲ級100.0%(6/6)，P<0.05;③宮頸癌組織PCNA陽性表達率Ⅰ級64.29%明顯低于Ⅱ級93.33%和Ⅲ級100.0%,P<0.05。結(jié)論p53基因突變在宮頸鱗癌發(fā)生中起重要作用，p53及PCNA檢測對于研究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和評估子宮頸癌惡性程度具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】抑癌基因p53;PCNA;宮頸癌;免疫組織化學

宮頸癌是嚴重危害婦女健康的常見惡性腫瘤之一，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位。國內(nèi)外大量研究顯示，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后與腫瘤抑制基因p53和增生細胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)活性密切相關(guān)^①②。目前有關(guān)p53基因及PCNA表達在子宮頸癌中的改變研究較少，我們通過對子宮頸癌組織和正常子宮頸組織中p53基因及PCNA表達進行檢測，旨在探討二者與宮頸癌的關(guān)系及臨床病理意義。

1、資料與方法

1.1 標本來源實驗組收集2001年1月—2008年12月我院病理科存檔的原發(fā)性宮頸癌石蠟包埋標本共35例，其中宮頸鱗癌30例，宮頸腺癌5例。年齡在28～72歲，平均年齡49.1歲，中位年齡50.2歲，病理組織學分級按WHO分級標準：Ⅰ級14例，Ⅱ級15例,Ⅲ級6例;所有患者術(shù)前均未經(jīng)放射線及化學藥物治療。對照組選取30例正常宮頸組織，來源于同期存檔的因子宮肌瘤手術(shù)切除的宮頸標本。實驗所用組織均經(jīng)過10%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)HE切片，經(jīng)病理學確診后，連續(xù)4μm切片備用。

1.2 實驗方法 采用ElivisionTM二步法，具體步驟按說明書進行。單克隆PCNA抗體購于北京中山公司，p53抗體福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，DAB顯色，蘇木精復染;以TBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定^① P53蛋白陽性定位主要在細胞核，也可定位在細胞質(zhì)，胞核出現(xiàn)棕黃色為染色陽性細胞。按1996年全國免疫組化技術(shù)與診斷標準化專題研討會意見，以陽性細胞數(shù)<25%為陰性(-)、25%～50%為弱陽性(+)、50%～70%為陽性(++)、>70%為強陽性(+++)。具體依染色細胞數(shù)及強弱分類，陰性(-)：陽性細胞數(shù)<25%，染色較淡;陽性(+～+++)：陽性細胞數(shù)>25%或>50%，染色較強、清晰。②PCNA陽性定位于細胞核，胞核出現(xiàn)棕黃色為陽性細胞。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(8.01版本)，單向有序資料采用秩和檢驗，率的比較用χ2檢驗。

2、結(jié)果

2.1 P53蛋白在宮頸癌組織的表達率 分別為85.71%(30/35)，明顯高于在正常宮頸組織中的表達率6.67%(2/30)，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義，χ2=11.814，P=0.001。

2.2 P53蛋白表達與宮頸癌分級的關(guān)系 隨著宮頸癌病理學分級的升高P53蛋白陽性表達率增高，Hc=5.4731，P=0.0193,差異有統(tǒng)計學意義。

P53蛋白表達與宮頸癌分級的關(guān)系分級n陽性陰性陽性率(%)Ⅰ級148657.14Ⅱ級1513286.67Ⅲ級660100.00

2.3 PCNA表達與宮頸癌分級的關(guān)系 PCNA陽性率隨宮頸癌級別升高而增高，Hc=5.7087,P=0.0221,差異有統(tǒng)計學意義。

PCNA表達與宮頸癌分級的關(guān)系分級n陽性陰性陽性率(%)]Ⅰ級149564.29Ⅱ級1514193.33Ⅲ級660100.00

3、討論

目前認為，細胞癌變在基因水平上的變化，一方面是癌基因的激活，另一方面是抑癌基因的失活。p53分為野生型和突變型，野生型p53是抑癌基因，對于維持細胞基因組的完整性、DNA損傷的修復及細胞周圍的正常運行均起重要作用，對細胞的增殖起負性調(diào)控作用，它的蛋白表達產(chǎn)物很不穩(wěn)定，不能被免疫組化檢測到。突變型p53是癌基因，它的蛋白表達產(chǎn)物能被免疫組化檢測到。我們研究的p53都是突變型。有文獻報道^③，在細胞生長過程中，突變型和野生型p53的比例是調(diào)節(jié)細胞生長和細胞增殖的重要因素，如果當突變型p53大于野生型p5310倍時，細胞可能發(fā)生轉(zhuǎn)化，導致癌變。在本研究中，p53在正常組和癌癥組中的表達是有差異的(χ2=11.814，P<0.001)，p53與病理分級有正相關(guān)關(guān)系，表現(xiàn)為隨著p53表達的增強，病理分級也逐步增高，說明了野生型p53的減弱表達、突變型p53的過表達在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。

PCNA是存在于細胞核中能影響細胞增殖的一種蛋白質(zhì)，為細胞增生及DNA合成所必需，是反映細胞增殖活性的重要標志之一^④。細胞增殖能力愈強，細胞周期紊亂愈重。細胞增殖失控和異常增殖將導致腫瘤發(fā)生。腫瘤細胞的增殖情況與腫瘤組織的分化狀態(tài)、侵襲能力以及預后密切相關(guān)。有研究報道，PCNA不僅可反映腫瘤細胞的增生能力，而且還與腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)^⑤⑥⑦。我們的研究結(jié)果顯示，子宮頸癌組織PCNA陽性指數(shù)顯著高于正常對照組(P<0.05)，而且隨病理分級的增高而顯著升高(P<0.05)。這提示PCNA的表達可以反映細胞所處的周期時相及細胞的分化程度。腫瘤分化程度越低，增殖活性越強，PCNA指數(shù)越高，腫瘤的浸潤能力和轉(zhuǎn)移能力越強，臨床預后越差。因此，PCNA的表達水平可比較客觀地反映宮頸癌細胞的惡性程度及其所處的生長狀態(tài)，可作為臨床醫(yī)生判斷宮頸癌惡性程度的一個分子生物學指標。

綜上所述，宮頸癌的發(fā)生受多基因調(diào)控，其中p53基因及其表達產(chǎn)物P53蛋白高表達共同存在于宮頸癌中，p53基因高表達缺失以及PCNA的表達上調(diào)參與了宮頸癌的演進過程。對宮頸病變做p53表達及PCNA指數(shù)檢測，作為了解病變生物學信息的窗口，對于子宮頸良惡性病變的診斷、子宮頸癌病理分級及臨床預后的判斷都具有重要的臨床意義。

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